افتراق سرووارهای بیماریزا از غیربیماریزای لپتوسپیرا به روش pcr بر مبنای ژن ompli و طراحی یک کنترل مثبت جهت بهینه سازی این تست تشخیصی

Authors

مهر انگیز دژبرد

گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج، کرج، ایران پژواک خاکی

گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج، کرج، ایران مجید اسمعیلی زاد

آزمایشگاه رفرانس لپتوسپیرا، بخش میکروب شناسی، موسسه تحقیقات و واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران بهزاد صالحی

گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج، کرج، ایران سهیلا مرادی بیدهندی

abstract

زمینه و اهداف: لپتوسپیروزیس، شایع ترین بیماری مشترک بین انسان و حیوان در سراسر جهان است. تشخیص صحیح و به موقع این بیماری حائز اهمیت می باشند. به علت کند رشد بودن لپتوسپیرا و شرایط خاص نگه داری و عدم دسترسی همگان به سوش های رفرانس استفاده از یک تست سریع و دقیق مولکولی مانند pcr به همراه یک کنترل مثبت به منظور تایید صحت آن ضروری می باشد. ژن ompli فقط در لپتوسپیراهای پاتوژن وجود دارد و در میان آنها شدیدا حفظ شده است. بنابراین می توان از آن در تست های تشخیصی مولکولی مانند pcr استفاده کرد. در تست pcr جهت اطمینان از دست یابی به نتیجه صحیح نیازممند یک کنترل مثبت هستیم. هدف این تحقیق بهره گیری از خصوصیات ژن ompli به منظور افتراق سرووارهای بیماریزای لپتوسیپیرا از غیر بیماریزا با استفاده از pcr و طراحی یک کنترل مثبت جهت بینه سازی این تست می باشد. روش بررسی: در این تحقیق از پنج سرووار بیماری زای لپتوسپیرا و یک سرووار غیر بیماری زا استفاده گردید. باکتری ها در محیط کشت اختصاصی کشت داده شدند و dna ژتومیک آنها تخلیص گردید. پرایمرهای اختصاصی جهت تکثیر ژن ompli طراحی و حساسیت و ویزگی آ«ن در pcr بررسی شد. جهت تهیه کنترل مثبت با استفاده از تکنیک کلونینگ، محصول pcr یکی از سرووار های پاتوژن به انتخاب خالص سازی شده و در وکتور pjet1.2/blunt الحاق گردید و در باکتری( e.coli (top10 کلون گردید. تخلیص dna نوترکیب توسط کیت انجام گرفت. پلاسمید حاوی ژن مورد نظر تعیین ترادف شد. یافته ها: با اتکا به داده های pcr مشخص شد که این ژن فقط در سرووارهای گونه پاتوژن حضور دارد و قطعه 963bp حاصل که نشان دهنده تکثیر ژن ompli می باشد در گونه غیربیماری زای بایفلکسا مشاهده نگردید. نتیجه گیری: نتایج حاصل از تعیین ترادف محصول pcr کلون شده، حضور ژن مورد نظر را تایید کرد. واکنش pcr برای dna نمونه به همراه کنترل مثبت در دو تیوب جداگانه انجام شد. محصول pcr مربوط به نمونه و کنترل مثبت با ژل الکتروفورز و سایز مارکر مقایسه و مورد تایید قرار گرفت.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

افتراق سرووارهای بیماریزا از غیربیماریزای لپتوسپیرا به روش PCR بر مبنای ژن ompLI و طراحی یک کنترل مثبت جهت بهینه سازی این تست تشخیصی

زمینه و اهداف: لپتوسپیروزیس، شایع ترین بیماری مشترک بین انسان و حیوان در سراسر جهان است. تشخیص صحیح و به موقع این بیماری حائز اهمیت می باشند. به علت کند رشد بودن لپتوسپیرا و شرایط خاص نگه داری و عدم دسترسی همگان به سوش های رفرانس استفاده از یک تست سریع و دقیق مولکولی مانند PCR به همراه یک کنترل مثبت به منظور تایید صحت آن ضروری می باشد. ژن ompLI فقط در لپتوسپیراهای پاتوژن وجود دارد و در میان آن...

full text

ازدیاد وتکثیر ژن invA سالمونلا به وسیله PCR بعنوان یک روش تشخیصی این باکتریها

هدف: تعیین ژن تهاجم سالمونلاها با روش PCR طرح: مطالعه آزمایشگاهی روش: تعداد 60 نمونه سالمونلای جداشده از منابع مختلف انسانی و دامی ابتدا با آزمایشات بیوشیمیایی‘ مورد تایید قرار گرفتند . و سپس گروه سرمی این نمونه ها به وسیله آنتی سرم های پلی والان ومونو والان تشخیص معین گردید. برای استخراج DNA آنها از روش جوشاندن استفاده گردید. از دو پرایمر اختصاصی S139 و S141 مطابق برنامه خاصی برای تکثیر ژن...

full text

کاربرد روش میکروآگلوتیناسیون در تعیین سرووارهای لپتوسپیرا

زمینه و هدف : لپتوسپیروزیس بیماری عفونی و زئونوزی است که توسط باکتری لپتوسپیرا ایجاد شده و به صورت مستقیم یا غیرمستقیم از حیوان به انسان انتقال می‌یابد. از آنجا که تشخیص سریع این بیماری می‌تواند در کنترل بیماری کمک شایانی نماید؛ این مطالعه به منظور تعیین سرووارهای شایع لپتوسپیرا با روش میکروآگلوتیناسیون (Microscopic Agglutination Test) در نمونه‌های سرمی انسان و دام انجام شد. روش بررسی : این مط...

full text

کلونینگ و تعیین توالی ژن کد کننده لیپوپروتئین سطحی LipL41 در باکتری لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار گریپوتیفوزا

زمینه و هدف: لپتوسپیروزیس یک بیماری عفونی می‌باشد که توسط سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا ایجاد می‌شود. افزایش ارتقای کیفی روش‌های کاربردی و معتبر در تشخیص این بیماری و همچنین تولید واکسن نوترکیب ، نیاز به آنتی‌ژن‌های اختصاصی دارد که در بین سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا یکسان و مشابه است. پروتئین‌های غشای خارجی لپتوسپیرا (OMPs)، آنتی‌ژن‌های مؤثری می‌باشند که قادر به تحریک پاسخ ایمنی مشخص در دوره ...

full text

ازدیاد وتکثیر ژن inva سالمونلا به وسیله pcr بعنوان یک روش تشخیصی این باکتریها

هدف: تعیین ژن تهاجم سالمونلاها با روش pcr طرح: مطالعه آزمایشگاهی روش: تعداد 60 نمونه سالمونلای جداشده از منابع مختلف انسانی و دامی ابتدا با آزمایشات بیوشیمیایی‘ مورد تایید قرار گرفتند . و سپس گروه سرمی این نمونه ها به وسیله آنتی سرم های پلی والان ومونو والان تشخیص معین گردید. برای استخراج dna آنها از روش جوشاندن استفاده گردید. از دو پرایمر اختصاصی s139 و s141 مطابق برنامه خاصی برای تکثیر ژن ...

full text

مقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure

کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله میکروب شناسی پزشکی ایران

جلد ۶، شماره ۳، صفحات ۴۵-۵۱

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023